Цель исследования. Оценить состояние Т-регуляторного звена иммунной системы у больных бронхиальной астмой (БА) с разными уровнями контроля над заболеванием.

Материал и методы. Обследовали 62 больных БА (21 больной с контролируемой БА, 20 больных с частично контролируемой БА, 21 больной с неконтролируемой БА) и 30 практически здоровых лиц (группа контроля). Определение лимфоцитов CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD3+CD16+, CD3-CD8+, CD25+, CD4+CD25hi в периферической крови проводили методом проточной цитофлюориметрии. Естественные регуляторные
Т-клетки определялись как фракция лимфоцитов CD4+CD25+ с высоким уровнем экспрессии CD25 (клетки CD4+CD25hi). Концентрации цитокинов — интерлейкина-4 (IL-4) и g-интерферона (IFN-g) — в сыворотке крови определяли методом иммуноферментного анализа.

Результаты. Неконтролируемая БА характеризуется снижением содержания в крови естественных регуляторных Т-клеток (CD4+CD25hi) и повышением содержания активированных клеток (СД25+) и концентрации IL-4. Для частично контролируемой БА характерно повышение процентного содержания клеток СД25+ и концентрации IL-4 при отсутствии различий по уровню клеток CD4+CD25hi по сравнению с их уровнем при контролируемой БА и в группе контроля. Контролируемая БА характеризуется отсутствием различий по уровню клеток CD4+CD25hi и СД25+ в сравнении с группой контроля и снижением концентрации IL-4 по сравнению с неконтролируемой и частично контролируемой БА.

Заключение. Полученные данные позволяют выявить особенности состояния Т-регуляторного звена иммунной системы у больных БА с разными уровнями контроля над заболеванием. Установлена взаимосвязь уровней контроля над БА с количеством естественных регуляторных Т-клеток: чем ниже количество естественных регуляторных Т-клеток, тем хуже контролируется заболевание. Степень дисбаланса Тh1/Тh2 с преобладанием активности Тh2-клеток у больных БА, определяемая по уровням IL-4 и IFN-g в сыворотке крови, находится в обратной зависимости от содержания естественных регуляторных Т-клеток в периферической крови. Естественные регуляторные Т-клетки через контроль баланса Тh1/Тh2 могут играть роль в достижении и поддержании контроля над БА. Данное предположение представляет собой новый взгляд на инициацию и прогрессирование БА и аллергических заболеваний.

Бронхиальная астма (БА) является одним из наиболее распространенных хронических заболеваний, представляющих глобальную проблему здравоохранения. В последние годы продолжается рост заболеваемости, инвалидности и смертности от этой болезни, а также сравнительной нечувствительности БА к проводимой терапии. Ранняя диагностика и назначение адекватной терапии с целью достижения контроля над заболеванием значительно снижают социально-экономический ущерб от БА и улучшают качество жизни пациентов [1].

Концепция патогенеза БА в настоящее время базируется на том, что в основе этого заболевания лежит хроническое персистирующее воспаление дыхательных путей, являющееся причиной развития как гиперчувствительности дыхательных путей к различным аллергенам и неспецифическим раздражителям, так и основных механизмов бронхиальной обструкции. Реакции, опосредующие аллергическое воспаление, являясь физиологическими и направленными на защиту от чужеродных агентов у больных БА вследствие нарушения регуляторных механизмов приводят к обструкции дыхательных путей. Одно из центральных мест в формировании обратимой обструкции бронхов у больных БА отводится Т-лимфоцитам. Они рассматриваются в качестве главного звена прогрессирования БА у взрослых как на местном, так и системном уровнях [2]. Активированные Т-хелперы 2-го типа (Тh2) за счет секреции цитокинов определяют характер и степень участия других клеток в аллергическом ответе [3]. Секретируя такие цитокины, как IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-13, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ), они стимулируют внутриклеточную продукцию IgE В-лимфоцитами, активность и пролиферацию эозинофилов, созревание тучных клеток, влияют на пролиферацию и выживаемость тучных клеток, базофилов, В-лимфоцитов, нейтрофилов и макрофагов [4].

В настоящее время внимание большинства исследователей сосредоточено на выяснении роли регуляторных Т-клеток в патологических процессах. Накапливаются данные относительно регуляции ими инфекционных, аутоиммунных заболеваний, бронхиальной астмы и аллергенспецифической иммунотерапии. На современном этапе естественные регуляторные Т-клетки (nTreg) рассматриваются как основные иммунорегуляторные клетки, способные к супрессии опосредованных Тh1- и Тh2-лимфоцитами вариантов иммунного ответа. Наиболее полно обосновано наличие регуляторных функций у субпопуляции Т-клеток CD4+, экспрессирую­щих a-цепь рецептора IL-2 (CD25) [5]. Эти клетки формируются в процессе нормальной дифференцировки в тимусе и осуществляют супрессорный эффект посредством прямого контакта с клетками-мишенями [6]. Содержание клеток CD25+ в субпопуляции наивных зрелых Т-клеток CD4+ периферической крови взрослых мышей составляет 5—10% [7]. У человека функции nТreg-клеток выполняют не все лимфоциты CD4+CD25+, а только их фракция с высоким уровнем экспрессии CD25 (клетки CD4+CD25hi) [8].

Теоретически естественные регуляторные Т-клетки могут влиять на развитие аллергических заболеваний и БА на разных стадиях, таких как аллергическая сенсибилизация, гиперчувствительность дыхательных путей, персистенция проявлений заболевания, прогрессирование аллергического воспаления, ремоделирование дыхательных путей. Однако в настоящее время недостаточно известно о роли nТreg-клеток при аллергии и БА, а сведения о состоянии Т-регуляторного звена иммунной системы при разных уровнях контроля над БА в доступной литературе отсутствуют.

С учетом вышесказанного целью данной работы было оценить состояние Т-регуляторного звена иммунной системы при контролируемом, частично контролируемом и неконтролируемом течении БА по уровню естественных регуляторных Т-клеток (CD4+CD25hi) и функциональной активности Т-хелперов (по продукции основных цитокинов Тh1- и Тh2-лимфоцитами — IFN-g и IL-4 соответственно).

М а т е р и а л и м е т о д ы

В исследование (2007—2008 гг.) включено 62 больных БА (21 больной с контролируемой БА, 20 больных с частично контролируемой БА, 21 больной с неконтролируемой БА) и 30 практически здоровых лиц (группа конт­роля). Статистически значимых различий по полу (критерий Манна—Уитни в обратном применении, Р=0,314) и возрасту (параметрический однофакторный дисперсионный анализ, Р=0,561) между группами не было.

Контролируемым течение БА считалось при полном отсутствии всех проявлений болезни (допускалось лишь наличие отдельных дневных симптомов и потребности в ингаляциях b2-агонистов короткого действия не чаще 2 раз в неделю). При частичном контроле у больных БА могли возникнуть более частые дневные симптомы, ограничение повседневной активности, более частая потребность в ингаляциях b2-агонистов короткого действия, ночные пробуждения или нарушение показателей спирометрии (объем форсированного выдоха за 1-ю секунду (ОФВ1) менее 80% от должного), обострения наблюдались раз в год и более. При наличии 3 и более показателей частичного контроля в любую неделю и/или 1 обострения в течение недели течение БА считалось неконтролируемым [1].

Базисную терапию принимали 57 (92%) больных БА, не принимали базисную терапию, несмотря на рекомендации врача, — 5 (8%) пациентов. Лечение БА соответствовало одной из пяти «ступеней терапии»: 43 (75%) больных использовали для поддерживающей терапии ингаляционные глюкокортикостероиды (ИГКС); 14 (25%) — комбинированную терапию (средние или высокие суточные дозы ИГКС+b2-агонист длительного действия); 21 пациенту (37%) назначали ИГКС в низких суточных дозах (200—500 мкг по беклометазона дипропионату); 21 (37%) — в средних суточных дозах (>500—1000 мкг по беклометазона дипропионату) и 1 (1%) — в высокой суточной дозе (1500 мкг по беклометазона дипропионату) [1]. В группе больных с контролируемой БА 14 (67%) пациентов получали ИГКС в низких суточных дозах, 5 (23%) — в средних суточных дозах, 1 (5%) — в высокой суточной дозе, 1 (5%) — комбинированную терапию (средние суточные дозы ИГКС+b2-агонист длительного действия). В группе больных с частично контролируемой БА 6 (30%) пациентам назначали ИГКС в низких суточных дозах, 6 (30%) — в средних суточных дозах, 6 (30%) — комбинированную терапию (средние суточные дозы ИГКС+b2-агонист длительного действия), 2 (10%) больных не получали базисную терапию. В группе больных с неконтролируе­мой БА 1 (5%) больной получал ИГКС в низкой суточной дозе, 10 (48%) — в средних суточных дозах, 7 (33%) — комбинированную терапию (причем 5 (71%) больных получали ИГКС в средних суточных дозах, а 2 (29%) — в высоких суточных дозах и b2-агонист длительного действия), не получали базисную терапию
3 (14%) пациента.

Обследование осуществляли с помощью клинических, лабораторных, функциональных и иммунологических методов исследования. Клиническое обследование заключалось в сборе анамнеза и количественной оценке в баллах основных семиотических проявлений БА (приступы удушья, кашель, одышка), потребности в ингаляциях b2-агонистов короткого действия, данных аускультации легких. Лабораторное обследование включало клинический анализ крови.

Исследование показателей функции внешнего дыхания проводили на компьютерном спирографе «МАС-1» (Беларусь). Определяли жизненную емкость легких (ЖЕЛ), форсированную жизненную емкость легких (ФЖЕЛ), ОФВ1, ОФВ1/ЖЕЛ, ОФВ1/ФЖЕЛ, пиковую объемную скорость выдоха (ПОСвыд.), максимальную объемную скорость воздуха на уровне выдоха 25% ФЖЕЛ (МОС25), максимальную объемную скорость воздуха на уровне выдоха 50% ФЖЕЛ (МОС50), максимальную объемную скорость воздуха на уровне выдоха 75% ФЖЕЛ (МОС75), среднюю объемную скорость воздуха за период выдоха от 25 до 75% ФЖЕЛ (СОС25—75), максимальную вентиляцию легких (МВЛ), а также проводили бронходилатационный тест с b2-агонистом короткого действия.

Концентрацию цитокинов IFN-g и IL-4 определяли в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-систем «Интерлейкин-4-ИФА-Бест» и «Гамма-интерферон-ИФА-Бест» («Вектор-Бест», Россия) в соответствии с рекомендациями фирмы-производителя.

Определение уровней Т-лимфоцитов (CD3+), Т-лимфоцитов-хелперов (CD4+), цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8+), естественных киллерных клеток (CD16+, CD3-CD8+), естественных киллерных клеток с фенотипом Т-лимфоцитов (CD3+CD16+), активированных клеток (CD25+), естественных регуляторных Т-клеток (CD4+CD25hi) осуществляли методом прямой иммунофлюоресценции на проточном цитофлюориметре «FACScan» («Becton Dickinson», США) [9]. Материалом для исследования являлась венозная кровь, которую забирали у больных БА и у здоровых лиц в утреннее время натощак в пробирки с гепарином (из расчета 20 ЕД на 1 мл крови). Для идентификации поверхностных маркеров применяли поверхностные антигенспецифичные моноклональные антитела («Beckman Coulter», США) к дифференцировочным клеточным антигенам, конъюгированные с флюорохромами фико­эритрином (PE), фикоэритрин-цианином 5 (PС5) и флюоресцеин изотиоцианатом (FITC). Естественные регуляторные Т-клетки определялись как фракция лимфоцитов CD4+CD25+ с высоким уровнем экспрессии CD25 (клетки CD4+CD25hi). Для изотипического контроля применяли подкласс иммуноглобулинов IgG1-РЕ/IgG1-РС5/IgG1-FITC («Beckman Coulter», США). Популяции и субпопуляции лимфоцитов оценивали в гейте лимфоцитов. В пробе анализировали не менее 30 000 клеток. Учет и анализ данных проводили в автоматическом режиме с использованием программы «CELLQuest». Иммунорегуляторный индекс (ИРИ) определяли по соотношению Т-хелперов/цитотоксических Т-лимфоцитов (CD4+/CD8+). Абсолютное количество лимфоцитов, несущих соответствующие маркеры, в 1 мкл крови рассчитывали относительно абсолютного числа всех лимфоцитов, принимаемого за 100%. Абсолютное количество естественных регуляторных Т-клеток (CD4+CD25hi) в 1 мкл крови рассчитывали относительно абсолютного числа лимфоцитов CD4+, принимаемого за 100%.

Статистическую обработку данных выполняли с использованием пакета прикладных программ STATISTICA 6.0 («StatSoft, Inc.», США). К количественным признакам, имеющим нормальное распределение (критерий Шапиро—Уилка, Р>0,05), при равенстве дисперсий распределений (критерий Левена, Р>0,05) применяли параметрические методы и использовали параметрический однофакторный дисперсионный анализ. К количественным признакам, имеющим распределение, отличное от нормального (критерий Шапиро—Уилка, Р<0,05), а также к качественным (порядковым или номинальным) признакам применяли непараметрические методы и использовали критерии Краскела—Уоллиса и Манна—Уитни. Для сравнения групп по качественному признаку использовали двусторонний точный критерий Фишера и анализ таблиц сопряженности с использованием критерия c2 Пирсона. Для анализа взаимосвязи количественного и качественного признака, а также количественных признаков, имеющих распределение, отличное от нормального, использовали непараметрический корреляционный метод Спирмена. Значения показателей приводятся как среднее значение ± стандартное отклонение (М±s) для величин признаков, подчиняющихся нормальному распределению, и как медиана (Ме 25—75%) для значений, не подчиняющихся нормальному распределению. За критический уровень статистической значимости принимали 95% вероятность безошибочного прогноза (Р<0,05) [10].

Р е з у л ь т а т ы и о б с у ж д е н и е

При сравнении групп больных по форме БА (анализ таблиц сопряженности с использованием критерия c2 Пирсона, Р=0,145) и базисной терапии (критерий Манна—Уитни в обратном применении, Р=0,112) статистически значимых различий выявлено не было. Статистически значимые различия (критерий Краскела—Уоллиса) получены по длительности заболевания (Р=0,026) и выраженности клинических симптомов (Р<0,001). Исходя из этого были проведены парные сравнения групп по этим параметрам с использованием критерия Манна—Уитни, выявившие статистически значимые различия.

Характеристика групп больных с разными уровнями контроля над БА и группы практически здоровых лиц представлена в табл. 1.

Группы различались также по частоте приема комбинированной базисной терапии (критерий Манна—Уитни в обратном применении, Р=0,018) и суточной дозе ИГКС (критерий Краскела—Уоллиса, Р=0,012). Количество больных с контролируемой БА, принимавших комбинированную терапию, было ниже (двусторонний точный критерий Фишера), чем больных с частично контролируемой (Р=0,035) и неконтролируемой (Р=0,015) БА. Суточная доза ИГКС в группе больных с контролируемой БА была ниже, чем в группе больных с неконтролируемой (критерий Манна—Уитни, Р=0,010) БА. Статистически значимых различий по частоте приема комбинированной базисной терапии (двусторонний точный критерий Фишера, Р=1,0) и суточной дозе ИГКС (критерий Манна—Уитни, Р=0,097) между группами больных с частично контролируемой и неконтролируемой БА не получено.

При сравнении показателей ФВД в исследуемых группах были выявлены статистически значимые различия по ФЖЕЛ, ОФВ₁, ОФВ₁/ЖЕЛ, ОФВ₁/ФЖЕЛ, МОС₇₅ (критерий Краскела—Уоллиса, Р<0,001), а также по ЖЕЛ, ПОСвыд., МОС25, МОС50, СОС25—75, МВЛ (параметрический дисперсионный анализ, Р<0,001), далее были проведены апостериорные сравнения средних (критерий Шеффе) для ЖЕЛ, ПОСвыд., МОС₂₅, МОС₅₀, СОС_25—75, МВЛ и парные сравнения групп по остальным показателям с использованием критерия Манна—Уитни.

Результаты оценки показателей ФВД практически здоровых лиц и больных БА с разными уровнями конт­роля над заболеванием представлены в табл. 2.

При сравнении показателей системы иммунитета в исследуемых группах выявлены статистически значимые различия по относительному количеству естественных регуляторных Т-клеток (CD4+CD25hi) (параметрический однофакторный дисперсионный анализ, Р<0,001) и активированных клеток (СД25+) (критерий Краскела—Уоллиса, Р<0,001), а также по абсолютному количеству клеток CD4+CD25hi (медианный тест, Р=0,033). Были проведены апостериорные сравнения средних для клеток CD4+CD25hi (критерий Шеффе) и парные сравнения групп по относительному количеству клеток СД25+ и абсолютному количеству клеток CD4+CD25hi с использованием критерия Манна—Уитни, выявившие статистически значимые различия по этим показателям (табл. 3).

Результаты оценки показателей клеточного иммунитета у практически здоровых лиц и у больных БА с разными уровнями контроля над заболеванием представлены в табл. 3.

Хорошо видно, что отличительной особенностью неконтролируемой БА является снижение процентного содержания естественных регуляторных Т-клеток (CD4+CD25hi) по сравнению с таковыми при частично контролируемой и контролируемой БА, а также снижение их процентного содержания и абсолютного количества по сравнению с таковыми в группе контроля (рис. 1) и повышение процентного содержания активированных клеток (СД25+) по сравнению с таковыми у пациентов с контролируемой БА и в группе контроля. Для частично контролируемой БА характерно повышение процентного содержания активированных клеток (СД25+) при отсутствии статистически значимых различий по уровню естественных регуляторных Т-клеток (CD4+CD25hi) по сравнению с данными показателями при контролируемой БА и в группе контроля. Пациенты с контролируемой БА характеризуются отсутствием статистически значимых различий по уровню клеток CD4+CD25hi и СД25+ от группы практически здоровых лиц. Статистически значимых различий по ИРИ, количеству лимфоцитов CD3+, CD4+, CD8+, естественных киллерных клеток (CD16+, CD3-CD8+, CD3+CD16+) в периферической крови практически здоровых лиц и больных БА с разными уровнями контроля над заболеванием выявлено не было.

Функциональную активность Т-лимфоцитов-хелперов 1-го и 2-го типов отражают уровни секретируемых ими цитокинов. Главными цитокинами Th1 являются IFN-g, a-фактор некроза опухоли (TNF-a), IL-2. Основными цитокинами Th2 служат IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13 [3]. Цитокины, продуцируемые Th1- и Th2-клетками, оказывают взаимоингибирующее действие на клетки альтернативного фенотипа: IFN-g подавляет пролиферацию и функции Th2-клеток, тогда как IL-4, IL-10 — Th1-клеток [3]. Для БА характерно нарушение соотношения Th1- и Th2-лимфоцитов, приводящее к поляризации Th2-клеток и усиленному синтезу ими цитокинов IL-4, IL-5, IL-9, IL-10, IL-13, которые подавляют пролиферацию
Th1-клеток и их функции [2—4]. Характерное для аллергического воспалительного поражения дыхательных путей нарушение профиля цитокинов можно выявить в бронхоальвеолярной лаважной жидкости (БАЛЖ) или, в меньшей степени, в сыворотке крови больных БА [11]. Получение БАЛЖ связано с необходимостью проведения многократных диагностических бронхоскопий и ограниченными возможностями стандартизации условий получения материала для повторных исследований. Поэтому материалом для исследования концентрации цитокинов в данной работе была сыворотка крови обследуемых лиц.

Концентрацию цитокинов IFN-g и IL-4 определяли в сыворотке крови у 15 практически здоровых лиц, у 60 больных БА (20 больных с контролируемой БА, у 20 больных с частично контролируемой БА, 20 больных с неконтролируемой БА). Статистически значимых различий по полу (критерий Манна—Уитни в обратном применении, Р=0,168) и возрасту (параметрический однофакторный дисперсионный анализ, Р=0,639) между группами не было.

Заслуживают внимания результаты корреляционного анализа по Спирмену, указывающие на сильные обратные корреляционные связи между концентрацией IL-4 и уровнем контроля над БА (r=-0,79; P<0,001; n=60), сильные положительные корреляционные связи между концентрацией IL-4 и выраженностью клинических проявлений БА (r=0,75; P<0,001; n=60), а также на умеренные обратные корреляционные связи между концентрацией IL-4 и ОФВ1 (r=-0,70; P<0,001; n=60). Иначе говоря, повышение концентрации IL-4 совпадало с ухудшением контроля над БА, утяжелением клинической симптоматики и ухудшением показателей бронхиальной проходимости.

При сравнении уровней цитокинов IFN-g и IL-4 в группах больных БА выявлены статистически значимые различия по IL-4 (критерий Краскела—Уоллиса, Р<0,001), но не по IFN-g (критерий Краскела—Уоллиса, Р=0,189). При проведении парных сравнений групп с применением критерия Манна—Уитни выявлены статистически значимые различия по IL-4.

Результаты оценки концентраций цитокинов IFN-g и IL-4 в сыворотке крови практически здоровых лиц и больных БА с разными уровнями контроля над заболеванием представлены в табл. 4.

У больных с неконтролируемой БА выявлено повышение концентрации IL-4 по сравнению с таковыми при частично контролируемой и контролируемой БА. У больных с частично контролируемой БА концентрация IL-4 превышала таковую в группе больных с контролируемой БА (рис. 2). Статистически значимых различий по уровню IFN-g в группах больных с разными уровнями контроля над БА выявлено не было. У больных с разными уровнями контроля над БА отмечалось повышение концентраций цитокинов IFN-g и IL-4 по сравнению с таковыми в группе практически здоровых лиц, причем преимущественно IL-4.

Отличительной особенностью неконтролируемой БА является снижение процентного содержания естественных регуляторных Т-клеток (CD4+CD25hi) по сравнению с таковыми при частично контролируемой и контролируемой БА, а также снижение их процентного содержания и абсолютного количества по сравнению с таковыми в группе контроля и повышение процентного содержания активированных клеток (СД25+) по сравнению с данными показателями при контролируемой БА и в группе контроля, что сопровождается повышением концентрации IL-4 и отражает активность аллергического воспалительного процесса с преобладанием Тh2-клеток.

Для частично контролируемой БА характерно повышение процентного содержания активированных клеток (СД25+) и концентрации IL-4 по сравнению с таковыми при контролируемой БА и в группе контроля при отсутствии статистически значимых различий по уровню естественных регуляторных Т-клеток (CD4+CD25hi).

Группа лиц с контролируемой БА характеризуется отсутствием статистически значимых различий по уровню клеток CD4+CD25hi и СД25+ от группы практически здоровых лиц и снижением концентрации IL-4 по сравнению с больными с неконтролируемой и с частично контролируемой БА.

Статистически значимых различий по уровню IFN-g в сыворотке крови у больных с разными уровнями контроля над БА выявлено не было.

У больных БА с разными уровнями контроля над заболеванием отмечается повышение концентраций цитокинов IFN-g и IL-4 по сравнению с данными показателями в группе практически здоровых лиц, причем преимущественно IL-4.

Статистически значимых различий по ИРИ, количеству лимфоцитов CD3+, CD4+, CD8+, естественных киллерных клеток (CD16+, CD3-CD8+, CD3+CD16+) у практически здоровых лиц и у больных БА с разными уровнями контроля над заболеванием выявлено не было.

У здоровых лиц Т-регуляция иммунного ответа обеспечивается за счет сбалансированной функциональной активности Т-лимфоцитов-хелперов 1-го и 2-го типа. Другим Т-регуляторным уровнем являются естественные регуляторные Т-клетки. Главными клетками-мишенями регуляторного действия nТreg-клеток являются клетки CD4+CD25- и CD8+, отвечающие на антиген [12], то есть активированные, однако, очевидно, сильнее проявляется действие nТreg-клеток на те субпопуляции Т-хелперов, функция которых повышена, что обозначается как регулирующее действие клеток CD4+CD25hi на баланс клеток Тh1/Th2 [13]. Так, при БА преимущественно проявляется подавляющее действие клеток CD4+CD25hi на Th2-ответ, вызванный аллергенами [14], поскольку отмечается дисбаланс Тh1/Th2 в сторону увеличения активности Th2, определяемый по изменению спектра основных цитокинов IL-4 и IFN-g и, прежде всего, по увеличению уровня IL-4. Формированию этого дисбаланса способствует уменьшение содержания nТreg-клеток, что согласуется с полученными другими авторами данными о способности nТreg-клеток подавлять аллергические процессы.

Так, в экспериментальной модели БА введение регуляторных клеток CD4+CD25+ Foxp3+, индуцированных трансформирующим b-фактором роста (TGF-b), предотвращало развитие патологии у мышей, сенсибилизированных клещевыми аллергенами [15]. Наоборот, уменьшение содержания nТreg-клеток вызывало накопление Тh2-клеток, индуцирующих эозинофильное воспаление дыхательных путей [16]. В пользу способности nTreg-клеток предотвращать аллергию свидетельствует работа, выполненная М. R. Karlsson и соавт. у детей с аллергией к коровьему молоку [17]. У детей, которые «переросли» аллергию и утратили гиперчувствительность к b-лактоглобулину, выявлено большее число nТreg-клеток в крови, чем у тех, у кого сохранялась клинически активная аллергия. Повышенное количество nTreg-клеток соответствовало сниженным in vitro пролиферативным ответам Т-клеток на пищевой аллерген b-лактоглобулин, но не пролиферативным ответам на поликлональную стимуляцию, указывая на присутствие аллерген­специфичных nTreg-клеток. Результаты выполненных работ указывают на потенциальную роль nTreg-клеток в спонтанном изменении течения БА и других аллергических заболеваний.

Данные исследования впервые демонстрируют взаимосвязь уровней контроля над БА с состоянием Т-регуляторного звена иммунной системы, показывая, что чем ниже количество nTreg-клеток в крови, тем хуже контролируется заболевание. Эти результаты, с точки зрения наличия и выраженности нарушений Т-регуляции, еще раз указывают на необходимость проведения дифференцированной базисной (поддерживающей) терапии, особенно при частично контролируемом и неконтролируемом течении БА, поскольку противовоспалительный эффект ГКС связан с их ингибирующим действием на клетки воспаления и их медиаторы, включая продукцию цитокинов, с одной стороны, и повышением экспрессии гена FOXP3, с которым связана супрессорная активность естественных регуляторных Т-клеток, с другой, что рассматривается как один из механизмов терапевтического действия ГКС [18, 19]. Имеются также данные о возможности развития nTreg-клеток на периферии иммунной системы из клеток CD4+CD25- под действием специфических условий или сигналов, одним из которых является воздействие ГКС [18].

В ы в о д ы

1. Установлены особенности состояния Т-регуляторного звена иммунной системы у больных БА с разными уровнями контроля над заболеванием:

— при неконтролируемом течении БА отмечается дисбаланс Т-регуляции иммунного ответа, проявляющийся снижением содержания в крови естественных регуляторных Т-клеток (CD4+CD25hi), повышением количества активированных клеток (СД25+) и концентрации IL-4;

— для частично контролируемой БА характерно повышение процентного содержания СД25+-клеток и концентрации IL-4 при отсутствии статистически значимых различий по уровню клеток CD4+CD25hi по сравнению с контролируемой БА и в группе контроля;

— контролируемая БА характеризуется отсутствием статистически значимых различий по уровню клеток CD4+CD25hi и СД25+ от таковых в группе контроля и снижением концентрации IL-4 по сравнению с неконт­ролируемой и частично контролируемой БА.

2. Установлена взаимосвязь уровней контроля над БА с количеством естественных регуляторных Т-клеток: чем ниже количество nTreg-клеток в крови, тем хуже контролируется заболевание.

3. Степень дисбаланса Тh1/Тh2 с преобладанием активности Тh2-клеток у больных БА, определяемая по уровням IL-4 и IFN-g в сыворотке крови, находится в обратной зависимости от содержания естественных регуляторных Т-клеток в периферической крови.

4. Естественные регуляторные Т-клетки через конт­роль баланса Тh1/Тh2 могут играть роль в достижении и поддержании контроля над БА. Данное предположение представляет собой новый взгляд на инициацию и прогрессирование БА и аллергических заболеваний.

Л И Т Е Р А Т У Р А

1. Глобальная стратегия лечения и профилактики бронхиальной астмы (GINA): Пересмотр 2006 г. / Под ред. А. Г. Чучалина— М., 2007.

2. Потапнев М. П., Печковский Д. В. // Пульмонология.— 1997.— № 3.— С. 74—81.

3. Медуницын Н. В. // Иммунология.— 1999.— № 5.— С. 5—9.

4. Larche M., Robinson D. C., Kay A. B. // J. Allergy Clin. Immunol.— 2003.— Vol. 111.— P. 450—463.

5. Ярилин А. А., Донецкова А. Д. // Иммунология.— 2006.—№ 3.— С. 176—188.

6. Piccirillo C. A., Shevach E. M. // Semin. Immunol.— 2004.— Vol. 16.— P. 81—88.

7. Sakaguchi S. // Annu. Rev. Immunol.— 2004.— Vol. 22.— P. 531—562.

8. Baecher-Allan C., Wolf E., Hafler D. A. // Clin. Immunol.— 2005.— Vol. 115.— P. 10—18.

9. Применение проточной цитометрии для оценки функциональной активности иммунной системы человека: Пособие для врачей-лаборантов / Сост. Б. В. Пинегин, А. А. Ярилин, А. В. Симонова и др.— М., 2001.

10. Реброва О. Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ Statistica.— М., 2002.

11. Bousguet J., Van Vyve T., Chanez P. et al. // Allergy.— 1989.— Vol. 7.— P. 145—173.

12. Nishikawa H., Kato T., Tawara I. et al. // J. Exp. Med.— 2005.— Vol. 201.— P. 681—686.

13. Nelson H. S. // J. Allergy Clin. Immunol.— 2004.— Vol. 113.— P. 635—642.

14. Robinson D. S. // Thorax.— 2004.— Vol. 59.— P. 640—643.

15. Chen W., Jin W., Hardegen N. et al. // J. Exp. Med.— 2003.— Vol. 198.— P. 1875—1886.

16. Jaffar Z., Sivacuru T., Roberts K. // J. Immunol.— 2004.— Vol. 172.— P. 3842—3849.

17. Karlsson M. R., Rugtveit J., Brandtzaeg P. // J. Exp. Med.— 2004.— Vol. 199.—P. 1679—1688.

18. Karagiannidis C., Akdis M., Holopainen P. et al. // J. Allergy Clin. Immunol.— 2004.— Vol. 114.— P. 1425—1433.

19. Fontenot J. D., Rasmussen J. P., Williams L. M. et al. // Immunity.— 2005.— Vol. 22.— P. 329—341.