Цель исследования. Определить мутации резистентности ВИЧ у ВИЧ-инфицированных пациентов, находящихся на ВААРТ, и наивных, не получающих антиретровирусные препараты.

Материал и методы. Представлены данные по определению мутаций резистентности у 173 пациентов с ВИЧ/ СПИДом, 77 из которых находились на ВААРТ, 96 не получали антиретровирусные препараты. Для выявления резистентных штаммов ВИЧ использовали методы РТ-ПЦР, секвенирование, программы Sequencing Analysis Software v. S.1.1, BioEdit, SeqScape v. 2.6, MEGA 4.1.

Результаты. Из 59 пациентов (взрослые) у 38 (64,4%) (24 мужчины и 14 женщин) выявлена мутация в положении M184V/I, которая является причиной появления высокого уровня резистентности ВИЧ к нуклеозидным ингибиторам обратной транскриптазы (НИОТ). В 27 (45,8%) случаях (13 женщин и 14 мужчин) определялась мутация K103N, ведущая к высокому уровню устойчивости ВИЧ к ненуклеозидным ингибиторам обратной транскриптазы (ННИОТ). В 20 (33,9%) случаях (16 мужчин и 4 женщины) обнаружили мутацию G190G/S/А, с которой связано появление мутаций высокого уровня резистентности к ННИОТ. В 15 (25,4%) случаях (3 женщины и 12 мужчин) определена комбинация мутаций M184V+G1905. У 11 (18,6%) пациентов (6женщин и S мужчин) с ВИЧ-инфекцией обнаружена комбинация мутаций резитентности K103N+M184V. Из 18 детей у 15 (83,3%) (9 девочек и 6 мальчиков) определена мутация в положении M184V, ведущая к высокому уровню резистентности к НИОТ. В 10 (55,6%) и 2 (11,1%) случаях выявлялись мутации в положении G1905 и K1035 соответственно. У 2 детей определена мутация Y188L, которая ведет к появлению устойчивости ВИЧ высокого уровня к ННИОТ. Определено, что распространенность первичных мутаций резистентности вируса к антиретровирусным препаратам в стране является низкой (<5%) для всех их классов.

Одной из основных причин, влияющих на эффективность высокоактивной антиретровирусной терапии (ВААРТ), является большая степень изменчивости определенных участков генома вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), ведущая к появлению мутаций, ассоциированных с резистентностью к препаратам антиретровирусной терапии (АРТ). В схемах АРТ применяется более 30 препаратов S классов, известны мутации в геноме вируса, ведущие к его устойчивости к этим препаратам [1—3]. Вместе с тем в настоящее время альтернативы ВААРТ не существует, применяющиеся схемы лечения позволяют значительно повысить жизненный статус данной категории пациентов.

Своевременное определение мутаций резистентности и, соответственно, смена схемы лечения лежат в основе эффективности ВААРТ.

В Республике Беларусь наблюдается стабильно высокий рост количества случаев ВИЧ/СПИДа.

На протяжении последних 5 лет в стране выявляется более 1000 новых случаев ежегодно. На 01.05.2014 в стране официально зарегистрировано 16 315 случаев ВИЧ/СПИДа, тогда как на 01.05.2013 было выявлено 14 663 ВИЧ-инфицированных. Таким образом, за год в стране выявлено 1652 новых случая инфицирования. Наибольшее количество случаев ВИЧ/СПИДа определялось в возрастной группе 15—29 лет (9005), в настоящее время большинство новых случаев ВИЧ- инфекции регистрируется в возрастной группе 30— 45 лет, основным механизмом передачи вируса становится сексуальный.

Так, если в 2012 г. на его долю приходилось 77,2% от всех новых случаев, то в 2014 г. более 83% пациентов инфицировались при половых контактах.

В настоящее время ВААРТ получают более 5000 пациентов, в 2008 г. — 1200, в 2004 г. — только 15 человек. Прогнозируется, что к 2015 г. АРТ будут получать 7000 пациентов.

Цель исследования — определить мутации резистентности ВИЧ у пациентов с ВИЧ/СПИДом, находящихся на ВААРТ, и у пациентов, не получающих АРТ.

Материал и методы

Мутации резистентности высокого уровня определяли у 77 пациентов (59 взрослых и 18 детей) с ВИЧ/ СПИДом, находящихся на ВААРТ, за период 2008— 2013 гг. Плазма крови от 96 пациентов с первично выявленным ВИЧ/СПИДом, не получающих АРТ, была исследована на наличие первичных мутаций резистентности. Для определения мутаций использовали коммерческую тест-систему «ViroSeq™ HIV-1, HIV-1 genotyping system v. 2.0» («Abbott», США) с аналитической чувствительностью 2-103 копий РНК/мл. Набор позволяет секвенировать участок гена pol ДНК ВИЧ-1, кодирующего синтез протеазы и 2/3 обратной транскриптазы (1800 п. н.). Электрофорез фрагментов ДНК после секвенирующей ПЦР проводили на генетическом анализаторе «ABI PRISM 3100-Avant» («Applied Biosystems», США).

Анализ полученных фрагментов и определение мутаций резистентности ВИЧ к препаратам АРТ осуществляли с использованием коммерческой базы данных «ViroSeq HIV-1 genotyping system software v. 2.6 analysis» («Abbott», США) и Stanford University «HIV Drug Resistance Database», а также сприменением программных продуктов «Sequencing Analysis Software v. S.1.1», «BioEdit», «SeqScape v. 2.6».

Для филогенетического анализа полученных фрагментов использовали программу «Mega 4.1» (деревья с корнем построены методом присоединения соседей).

ЛИТЕРАТУРА
1. Boyer P. L., Sarafianos S. G., Arnold Е., Hughes S. H. // J. Virol.— 2002.— Vol. 76.— P. 9143—9251.
P. Casado J. l., Moreno A., Hertogs K., et al. // AIDS Res. Hum. Retrovir.— 2002.— Vol. 18.— P. 771—775.
3.    Kellam P., Larder B. A. // J. Virol.— 1995.— Vol. 69.— P. 669— 674.
4.    Krusi A., Milloy M. J., Kerr Т., et al. //Antivir. Ther.— 2010.— Vol. IS, № S.— P. 789—796.
5.    Laisaar K. Т., Uuskula A., Sharma A., et al. // AIDS Care.— 2013.— Vol. 25, № 7.— P. 863—873.
6.    Lukashov V. V., Karamov Е. V., Eremin V. F., et al. // AIDS Res. Hum. Retrovir.— 1998.— Vol. 14.— P. 1299—1303.

Поступила 08.07.14.

Адрес для корреспонденции:
Ерёмин Владимир Федорович.
Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии.
220114, Минск, ул. Филимонова 23; сл. тел. (8-017) 268-04-16.