Перейти к основному содержанию

Научно-практический рецензируемый ежемеcячный журнал. Орган Министерства здравоохранения Республики Беларусь
Входит в Перечень научных изданий Республики Беларусь для опубликования результатов диссертационных исследований по медицинским и биологическим наукам. Журнал включен в систему Российского научного цитирования.
Журнал издается с 1924 года.

Сравнительная противовирусная активность нативных тритерпеноидов

It appears your Web browser is not configured to display PDF files. Download adobe Acrobat or click here to download the PDF file.

Click here to download the PDF file.

Цель исследования. Изучение противовирусных свойств природных тритерпеновых соединений в экспериментах на культуре клеток и лабораторных животных.

Материал и методы. Лупеол, бетулин, бетулоновая и бетулиновая кислоты синтезированы в Институте органической химии Уфимского научного центра РАН. Их противовирусные свойства определяли в экспериментах на культурах клеток с вирусами простого герпеса 1-го типа, гриппа A/FPV/Rostock/34 (H7N1) и ECHO 6. При выполнении экспериментов на животных использовали беспородных белых мышей, экспериментальные мази бетулина и бетулиновой кислоты, а также ацикловира и бутаминофена как препаратов сравнения.

Результаты. Установлено, что исследованные вещества обладают наиболее высокой ингибирующей активностью в отношении вируса герпеса, в частности бетулин, бетулиновая и бетулоновая кислоты. В отношении вирусов гриппа А (H7N1) и ECHO 6 эти соединения неактивны или проявляют малозаметную активность. В экспериментах на лабораторных животных (кожный герпес белых мышей) наиболее высока эффективность мази бетулина.

Заключение. Полученные данные свидетельствуют о перспективности природных тритерпеновых соединений для разработки на их основе противовирусных лекарственных средств.

Из индивидуальных веществ, получаемых из растительного сырья, значительное внимание уделяется тритерпеноидам. Характерными представителями природных лупановых тритерпеноидов являются лупеол, бетулин, бетулиновая и бетулоновая кислоты.

Интерес к противовирусным свойствам соединений тритерпенового ряда вызван тем, что производные бетулиновой кислоты идентифицированы как новый класс потенциально селективных ингибиторов ВИЧ-1 [1]. Считается, что производные бетулиновой кислоты блокируют начальные (слияние) и/или заключительные стадии взаимодействия вируса с клеткой. Поскольку стадия слияния является общей для всех оболочечных вирусов, рабочей гипотезой при выполнении исследования стало предположение, что противовирусные свойства производных бетулиновой кислоты, вероятно, не ограничиваются только ВИЧ [2].

Целью настоящего исследования явилось исследование противовирусных свойств природных тритерпеновых соединений в экспериментах на культуре клеток и лабораторных животных.

Материал и методы

В работе использовали вирусы простого герпеса 1-го типа (ВГП-1), гриппа A/FPV/Rostock/34 (H7N1) и ECHO 6, полученные из Национальной коллекции вирусов Института вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН. Бетулин, бетулоновая и бетулиновая кислоты, а также другие тритерпеноиды синтезированы в Институте органической химии Уфимского научного центра РАН.

Противовирусные свойства определяли в экспериментах на культурах клеток методом редукции бляшек на культуре первичных фибробластов эмбрионов кур (ФЭК) с FPV и методом оценки цитопатического эффекта (ЦПЭ) на культуре клеток рабдомиосаркомы человека (RD) с ВПГ-1 и вирусом ECHO 6, как описано нами ранее [3]. Изучаемые соединения предварительно растворяли в 10% растворе этанола и затем готовили ряд последовательных разведений на среде поддержки, как правило, двукратных, до получения требуемых концентраций. Критерием противовирусного действия считали снижение титра вируса в присутствии соединений в сравнении с контролем. Вычисляли также концентрации 50% и 95% подавления размножения вируса (среднеи 95% эффективная концентрации — EC50 и ЕС95) и отношение максимальной переносимой концентрации (МПК) к EC50 и ЕС95. МПК соединений для неинфицированных культур клеток определяли после 72 ч инкубации.

Вирулицидные свойства исследовали в отношении ВПГ-1. Вирусосодержащую суспензию объединяли с равным объемом разведений исследуемого вещества на среде поддержки. Смесь выдерживали при комнатной температуре в течение 60 мин. Инфекционность остаточного вируса определяли по наличию ЦПЭ методом конечных разведений. Снижение титра вируса под влиянием исследуемого вещества за время экспозиции вычисляли как разность между значениями снижения титра вируса в точках «0» (без экспозиции) и «60» (с экспозицией).

При выполнении экспериментов на животных использовали беспородных самцов белых мышей массой 20—25 г (Институт биоорганической химии НАН Беларуси), ВПГ 1-го типа (ВПГ, штамм 1 С), экспериментальные мази ацикловира (2,5%) и бутаминофена (1%), подготовленные в РУП «Белмедпрепараты». Вирус поддерживали в рабочем титре (6 lg ТЦИД50/мл) пассированием на культуре клеток RD. Экспериментальный герпес мышей воспроизводили согласно методу, описанному М. R. Boyd и соавт. [4], с некоторыми изменениями, имеющими отношение в основном к способу наркотизации и используемому штамму вируса. Животных вводили в наркоз с помощью эфира до начала стадии засыпания. Внутреннюю поверхность правой ушной раковины каждой мыши скарифицировали инъекционной иглой, затем наносили 20 мкл вирусосодержащей жидкости (среда DMEM с 10% сыворотки эмбрионов крупного рогатого скота). Лечение животных (по 5—7 в каждой группе) начинали на следующий день после инфицирования и продолжали в течение 5 сут. Мази наносили 3 раза в сутки (9:00, 15:00 и 21:00). Об эффективности препаратов судили по степени развития признаков поражения, основными из которых являлись обратимые эритема и пузырьки (корки, струпы, язвы на месте их образования), а также необратимые несращения и перфорации тканей уха в местах скарификации. Наличие эритемы в зависимости от степени выраженности и площади охвата оценивали в 0,5 балла или 1 балл; наличие везикул, корок, струпов, язв — от 1 до 2 баллов (I — изолированные поражения, 2 — сливные). Оценки эритемы и наличия везикул суммировали. Для каждой группы животных вычисляли средний балл. Необратимые несращения мест скарификации или перфорации тканей уха оценивали отдельно как дополнительный признак, поскольку в общей сумме оценок он мешал определению сроков выздоровления.

Учитывая неодинаковую начальную реакцию на скарификацию после инфицирования, усредненные экспериментальные данные подвергали дополнительной обработке. Вычисляли общее среднее значение оценок для всех групп животных в 1-е сутки после инфицирования (хср). Разность средних оценок в отдельных группах в 1-е сутки наблюдения с общим средним значением (хср—х(.) суммировали со средними оценками в группах, если поражения в 1-е сутки были ниже, или вычитали, если поражения были выше среднего значения. Далее из полученных результатов вычитали среднюю оценку реакции на скарификацию в группе неинфицированных животных по суткам [S].
Статистическую обработку результатов для оценки достоверности различий между средними значениями в группах животных проводили с использованием общепринятых методов вариационной статистики (t-критерий).
 
ЛИТЕРАТУРА
1.    Soler F., Poujade C., Evers М., et al. // Med. Chem.— 1996.— Vol. 39, № S.— P. 1069—1083.
2.    Boreko E. I., Pavlova N. I., Savinova О. V., et al. //N. Biomed. Sci. (Весц HAH Беларуа. Сер. мед.-биол. навук).— 2002.— № 3.— P. 86—90.
3.    Бореко E. И., Павлова H. И., Зайцева Г.В. и др. // Вопр. вирусологии.— 2001.— № S.— С. 40—42.
4.    Boyd М. R., Bacon Т. N., Sutton D. // Antimicrob. Ag. Chemother.— 1988.— Vol. 32, № 1.— P. 358—363.
5.    Бореко E. И., Савинова О. В., Павлова H. И. и др. // Соврем. пробл. инф. патологии человека (эпидемиол., клиника, вирусол., микробиол. и иммунол.): Материалы НИИ эпидемиол. и микробиол. по итогам выполнен. ГНТП «Инфекции и мед. биотехнол.» 2001—2005 гг.— Минск, 2005.— С. 417—424.
6.    Вотяков В. И., Бореко E. И., Владыко Г.В. и др. Первичное изучение антивирусных свойств синтетических и природных соединений: Методич. рекомендации.— Минск, 1986.
7.    Spruance S. L., Freeman D. J., Sheth N. V. //Antimicrob. Ag. Chemother.— 1985.— Vol. 28, № 1.— P. 103—106.
8.    Spruance S. L., McKeough M. B., Cardinal J. R. // Antimicrob. Ag. Chemother.— 1984.— Vol. 25, № 1.— P. 10—15.

Поступила 08.07.14.

Адрес для корреспонденции:
Бореко Евгений Иванович.
Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии.
220114, г. Минск, ул. Филимонова, 23; сл. тел. (8-017) 267-32-67.

  • Я только что вернулся с большого международного форума врачей и ученых, проходившего в Санкт-Петербурге. На нем обсуждались вопросы совершенствования диагностики и лечения хронического миелолейкоза. Мы теперь уже добились того, что продолжительность жизни таких больных увеличилась в четыре раза, в России уже живут, радуются жизни и трудятся люди, излеченные от этого тяжелого заболевания... На форуме наряду с отечественными клиницистами выступали гематологи из Хьюстона (США), Турина (Италия), Мангейма (Германия).
  • Я вспоминаю свои беседы с больными — преподавателями медицинского института, профессорами. Что говорить, трудно с ними работать! Трудно с ними говорить и действовать, как со всеми остальными пациентами...Что еще характерно для заболевшего врача в психологическом плане? Частенько такой пациент напрочь забывает не только действие препаратов, но и время их приема, хотя сам в своей жизни неоднократно назначал их.
  • При осмотре мы прежде всего также уделяем особое внимание кожному покрову. Нормальная кожа и изменения ее при различных заболеваниях довольно подробно представлены в учебниках и монографиях. Здесь мне хочется лишь привести некоторые сведения, которые будут интересны врачам различных специальностей и позволят понять, почему кожа претерпевает изменения. Известно, что кожа — это полноценный орган, который дополняет и дублирует функции различных внутренних органов. Она активно участвует в процессе дыхания, выделения, обмене веществ.
  • Я никогда не заканчиваю расспроса-беседы с больным без того, чтобы выяснить хотя бы ориентировочно состояние взаимоотношений в семье. Полипрагмазия — бич современной медицины, клиники внутренних болезней. На обходах часто приходится видеть, как больным назначают 13—16 препаратов, нередко с взаимоисключающими фармакологическими свойствами.
  • Изучив сотни диагностических ошибок, сотрудники нашего коллектива убедились, что в ходе диагностического процесса практические врачи нарушают даже самые элементарные правила логики. Например, они неправильно применяют методы аналогии, индукции, дедукции.
  • А в настоящее время мне самому приходилось и в поликлиниках, и в стационарах слышать такие «уважительные и милые» обращения медицинских работников (и даже студентов, которые берут со старших пример!!!), как «голубушка», «бабуля», «золотце», «милочка», «голубчик», «бабуся», «дедуся», «дедуля», «женщина», «человек», «старик», «папаша», «мамаша», «отец», «мать», «барышня», «мужик», «тетя», «дядя» и т. д. Многие из таких слов для больных обидны, полны презрения, как правило, задевают самолюбие пациентов и их родственников.
  • Он редко выслушивал до конца доклад о больном, часто сразу же задавал вопросы, уточняющие характер течения болезни, особенности жизни. Удивительно, что вслух он мог сказать: «Что-то тут мне не ясно. Чего-то не хватает в истории болезни». И начинал сам собирать и выяснять эти «недостающие звенья».
© Редакция журнала «Здравоохранение» - 1924 - 2014гг.
Разработка сайта - doktora.by - сайт для врачей Беларуси