Разработка и совершенствование методов иммунодиагностики аденовирусной инфекции

Цель исследования. Создание усовершенствованных иммунофлюоресцентных и иммуноферментных тест-систем для диагностики аденовирусной инфекции.

Материал и методы. В работе использовали аденовирусы трех серотипов (1-й, 3-й, 5-й). Накопление вирусов проводили на культуре клеток Hep-2С. В качестве ростовых сред использовали питательные среды Игла: МЕМ и DМЕМ. Для метки выделенных иммуноглобулинов использовали хроматографически чистый флюоресцеинизотиоцианат (ФИТЦ) с содержанием основного вещества не ниже 85%. Нагрузку красителя на белок подбирали, исходя из спектра концентраций от 1,0 до 30 мкг/г.

Электрофорез белков в полиакриламидном геле проводили по методу U. K. Laemmli, иммуноблоттинг — по стандартной методике, описанной H. Towbin.

Результаты. Разработаны иммунофлюоресцентные и иммуноферментные тест-системы для диагностики аденовирусной инфекции. Отработан режим получения меченных ФИТЦ иммуноглобулинов и оценена возможность их использования для детекции антигена аденовируса. Получен антиген и установлены оптимальные условия проведения реакции определения IgM и IgG в сыворотке крови больных с аденовирусной инфекцией. Для подтверждения специфичности детекции антител проведена сравнительная постановка ИФА с коммерческой тест-системой («DRG», Германия), а также определение антител IgG и IgM у людей с различной патологией и здоровых.

Ключевые слова: , ,
Автор(ы): Орлова С. В., Бореко Е. И., Капитулец Н. Н.
Медучреждение: РНПЦ эпидемиологии и микробиологии Минздрава Республики Беларусь