Влияние лейаргунала на течение хронического периодонтита и иммунный статус

Цель исследования. Изучить влияние лейаргунала на фенотип лейкоцитов периферической крови, концентрацию цитокинов: IL-Ifi, TNF-a, IL-6, IL-12, IL-2, IL-4, IFN-y, IFN-a, TGF-fi1, антител классов: IgA, IgM, IgE, подклассов IgG в сыворотке крови и клинические периодонтальные параметры у пациентов с хроническим периодонтитом (ХП).

Материал и методы. Эффективность лейаргунала изучали у 60 пациентов с ХП рандомизированным двойным слепым плацебоконтролируемым проспективным методом. Использовали клинические и иммунологические методы.

Результаты. Применение лейаргунала у пациентов с ХП приводило к изменениям фенотипического состава лейкоцитов и лимфоцитов периферической крови, показателей профиля цитокинов и иммуноглобулинов сыворотки крови, улучшению клинических периодонтальных параметров.

Заключение. Включение иммунотерапии лейаргуналом в комплексное лечение ХП увеличивает его эффективность по сравнению с традиционным методом.

Хронический периодонтит (ХП)— инфекционно-воспалительное заболевание, имеющее рецидивирующее течение. Определяющим фактором развития периодонтальной инфекции и прогрессирования ХП является неспособность механизмов естественного и адаптивного иммунитета адекватно выполнять защитные функции [1—3].
Несмотря на постоянное усовершенствование методов и тактики проводимой базовой терапии ХП, эффективность ее часто бывает невысокой. Одна из причин — игнорирование нарушений со стороны системы иммунитета. Поскольку любое хроническое инфекционновоспалительное заболевание сопровождается иммунодефицитом, актуальность проблемы восстановления иммунной функции организма с помощью иммуномодулирующих лекарственных средств не вызывает сомнения, однако вопрос о необходимости применения методов иммунокоррекции в комплексном лечении заболеваний периодонта остается дискуссионным. Принципы иммунокоррекции в терапии хронического периодонтита в настоящее время изучены недостаточно.

Определение уровня и степени поражения иммунной системы является одним из этапов в подборе иммунотерапии. Точка приложения действия лекарственного средства должна соответствовать уровню нарушения деятельности определенного звена иммунной системы с целью обеспечения максимальной эффективности проводимой терапии. Применение иммунокорригирующих и иммуномодулирущих средств должно обосновываться как клиническими, так и лабораторными данными обследования пациента [4].

Значительная частота ХП, так или иначе связанных с недостаточностью системы общего и местного иммунитета, обусловила развитие клинических исследований по коррекции этих нарушений путем использования различных иммуномодулирующих средств и методов [5—14]. Ведется постоянный поиск новых лечебных методов направленной иммунокоррекции, способных зафиксировать положительный результат лечения.

Мы предложили использовать в комплексном лечении заболеваний периодонта новый иммуномодулятор «Лейаргунал» производства РУП «Гродненский завод медицинских препаратов», содержащий L-лейцин, L-аргинин и инозин.

Результаты иммунологических исследований по оценке иммуномодулирующего действия L-лейцина доказывают его стимулирующий эффект в отношении факторов неспецифической резистентности, а метаболические последствия его перорального применения в целом носят адаптивный характер [15, 16]. Адаптивные воздействия происходят на различных уровнях (молекулярный, клеточный, тканевый). Таким образом, одним из механизмов действия лейцина на систему иммунитета является улучшение метаболических процессов в иммунокомпетентных клетках и тканях. Это связано с тем, что незаменимая аминокислота L-лейцин является наиболее критичной для синтеза большинства цитокинов и их рецепторов, так как в их молекулах, состоящих из 20 аминокислот, L-лейцина содержится больше всего.
L-аргинин и его метаболит оксид азота регулируют иммунную, нервную, эндокринную системы [17—19].

Инозин — пуриновый нуклеозид, предшественник АТФ. Инозин усиливает активность ферментов цикла Кребса, проникая в клетки, обеспечивает их энергией; снижает агрегацию тромбоцитов, активирует регенерацию тканей (миокарда, слизистой оболочки желудочнокишечного тракта).

Цель исследования — изучить влияние лейаргунала на фенотип лейкоцитов периферической крови, концентрацию цитокинов: IL-1p, TNF-a, IL-6, IL-12, IL-2, IL-4, IFN-y, IFN-a, TGF-p1; антител классов: IgA, IgM, IgE, подклассов IgG1—IgG4 сыворотки крови и клинические периодонтальные параметры у пациентов с ХП.

Материал и методы

Исследование проводилось в рамках программы «II фаза клинических испытаний эффективности лекарственного средства «Лейаргунал» (лейцин/инозин/аргинин) производства РУП «Гродненский завод медицинских препаратов» в сравнении с плацебо» (№ 471 МЗ РБ от 23.08.2008) [20]. Было проведено обследование 80 пациентов с диагнозом ХП. Из них по критериям включения сформирована группа из 60 человек с ХП различной степени тяжести в возрасте от 23 до 65 лет из числа обратившихся в областную стоматологическую поликлинику Витебска и на кафедру терапевтической стоматологии ВГМУ. Критерии включения в исследование: 1) проведенная базовая терапия — периодонтальное лечение; 2) возраст 18—65 лет; 3) отсутствие системных заболеваний; 4) отсутствие системной антибактериальной, иммуномодулирующей и противовоспалительной терапии; 5) отсутствие беременности у женщин. Письменное информированное согласие на участие в исследовании получено от всех обследованных.

У всех пациентов, включенных в исследование, определяли индекс налета (PI SilnessLoe, 1964) [21, 22], индекс кровоточивости десневой борозды (SBI) в модификации I. Cowell [23], периодонтальный индекс (PI Russel) [24], измеряли глубину периодонтальных карманов (ПК), клиническую потерю прикрепления, получены рентгенологические данные о деструкции альвеолярной кости (использован метод панорамной рентгенографии, ортопантомограф «Othophos 3» (Sirona, Германия), рентгенологическая нагрузка 0,07 мЗв, прицельные дентальные снимки).

Исследование эффективности лейаргунала проводили по протоколу двойного слепого рандомизированного контролируемого проспективного исследования в параллельных группах пациентов с плацебоконтролем. В соответствии с протоколом проведена процедура простой одномоментной рандомизации пациентов с ХП с присвоением каждому из них рандомизационного кода и выдачей маркированных (А или В) пакетов с препаратом (лейаргунал или плацебо). Лекарственная форма препарата — порошок; 30 пациентов с ХП получали 1 г порошка из пакетиков с маркировкой «А», 30 — 1 г порошка из пакетиков с маркировкой «В» ежедневно однократно 21 день.

Лейаргунал (1 г) содержит 500 мг L-лейцина, 300 мг L-аргинина гидрохлорида, 200 мг инозина. Плацебо производства РУП «Гродненский завод медицинских препаратов» содержал лактозы моногидрата 500 мг, натрия хлорида 200 мг, вспомогательные средства 300 мг. Перед приемом порошок растворяли в 200 г теплой кипяченой воды.
Индексную оценку состояния периодонта проводили на момент включения в исследование, после периодонтального лечения, через 3, 6и 12 мес после окончания фармакотерапии.

Определение абсолютного и относительного количества лейкоцитов и лимфоцитов, их типирование по кластерам дифференциации; цитокинов и иммуноглобулинов сыворотки крови осуществляли двукратно — за 3-е суток до начала фармакотерапии и через 3 сут после ее окончания.

Для определения субпопуляций клеток использовали гепаринизированную периферическую кровь. Фенотипирование проводили на проточном цитофлюориметре «Су^т^ FC 500» («Becton Dickinson», США) согласно инструкции изготовителя.

Изучение популяций лейкоцитов и лимфоцитов осуществляли с применением моноклональных антител Mouse antihuman, меченных флюорофорами: CD3(FITC), (MHCD0301—4); CD4(РE—CY5.5), (MHCD0418); CD8(PE—CY7), (MHCD0812); CD13(FITC), (MHCD1301); CD14(PE—TR), (MHCD1417); CD19(PE-CY7), (MHCD1912); CD22(R—PE), (MHCD2204); CD34(R—PE), (CD3458104), CD38(FITC), (CD3801); HLA—DR(PE—TR), (MHLDR17); CD95(R—PE), (MHCD95044); CD71 (FITC), (CD7101); CD69(PE—CY5.5), (CD6918); CD56(R—PE), (CD5612); CD45(PE—CY7), (CD4512); CD45 (PE—CY5.5), (CD4518); CD45 (PE—TR), (CD4517) Life Technologies; CD25 Beckman Counter, (ECD6607112).

Для определения цитокинов и иммуноглобулинов венозную кровь от каждого пациента собирали в сухие стерильные пробирки, транспортировали в лабораторию, сыворотку крови центрифугировали, замораживали в жидком азоте и до исследования хранили при температуре -196°C.

Содержание цитокинов, IgE и подклассов IgG в сыворотке крови измеряли методом твердофазного иммуноферментного анализа, используя соответствующие наборы реагентов в соответствии с прилагаемыми инструкциями: для TNF-a (минимально определяемая концентрация (м.о.к.) составляла 1 пг/мл), IL-1p (достоверно определяемая концентрация в диапазоне 6,3-400 пг/мл), IFN-a — ОАО «Цитокин» (СанктПетербург, Россия); для IL-6 (м.о.к. 0,5 пг/мл), IL-4 (м.о.к. 0,4 пг/мл), IL-2 (м.о.к. 2 пг/мл), IFN-y, IgG1, IgGp, IgG3, IgGR, IgE — ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск, Россия); для TGF-p1 (м.о.к. 1,9 пг/мл)— DRG Diagnostics; для IL-12 (м.о.к. 3 пг/мл) — Thermo SCIENTIFIC.
IgA, IgM определяли методом радиальной иммунодиффузии в агаре по Манчини с использованием моноспецифической сыворотки против IgA и IgM НИИЭМ РАМН.
Статистическую обработку результатов исследования осуществляли на персональном компьютере с применением программ MS EXCEL, STATSOFT STAT1STICA 7.

Выводы

1. Применение лекарственного средства «Лейаргунал» у пациентов с хроническим периодонтитом приводило к модуляциям фенотипического состава лейкоцитов и лимфоцитов периферической крови, изменениям показателей профиля цитокинов и иммуноглобулинов сыворотки крови.

2. Включение иммуномодулятора «Лейаргунал» в комплексное лечение хронического периодонтита позволило получить более выраженный клинический результат: уменьшение глубины периодонтальных карманов (Р=0,003), значений индексов SBI (Р=0,0004), PI Russel (Р=0,0001) по сравнению с пациентами, получавшими базовое лечение и препарат плацебо.

ЛИТЕРАТУРА
1.Van Dyke Т. Е., Serhan С. Н. // J. Dent. Res.— 2003.— Vol. 82, № 2.— P. 82—90.
2.Van Dyke Т. Е. // Periodontol.— 2007.— Vol. 45.— P. 158—I66.
3.Цепов Л. M., Николаев А. И., Михеева Е. А., Сорокина Н. В. // Пародонтология.— 2004.— № 1.— С. 3—7.
4.Новиков Д. К., Новикова В. И., Сергеев Ю. В. // Иммунопатология, аллергология, инфектология.— 2002.— № 3.— С. 7—18.
5.Цепов Л. М., Орехова Л. Ю., Николаев А. И., Михеева Е. А. // Пародонтология.— 2005.— № 4 (37).— С. 3—7.
6.Кирсанов А. И., Гэрбачева И. А., Орехова Л. Ю. и др. // Пародонтология.— 2000.— № 2 (16).— С. 28—30.
7.Чубатова С. А., Жиленков Е. Л., Попова В. М. // Пародонтология.— 2000.— № 4 (18).— С. 48—S2.
8.Рыбаков А. И., Исаев В. Н., Иванюшко Т. П. //Иммунология.— 1996.— № 6.— С. S7—S9.
9.Кузник Б. И., Пинелис И. С., Хавинсон В. X. Применение пептидных биорегуляторов в стоматологии.— СПб., 1999.— С. 84—87.
10.Савенок Е. Н. Оптимизация тактики лечения хронических пародонтитов с использованием техники направленной иммунокорррекции: Автореф. дис. …канд. мед. наук.— Воронеж, 2000.
11.Кравченко Е. В. Противовоспалительные цитокины в комплексном лечении воспалительных заболеваний пародонта: Автореф. дис. .канд. мед. наук.— Краснодар, 2000.
12.Ковальчук Л. В., Ганковская Л. В. // Аллергия, астма и клинич. иммунология.— 2000.— № 7.— С. 25—27.
13.Шаповалов В. Д. // Иммунология.— 2001.— № 6.— С. 34—36.
14.Булкина Н. В., Глыбочко А. П. // Саратов. науч.мед. журн.— 2009.— Т. 5, № 2.— С. 238—242.
15.Shennan D. В. // Biochim. Biophys. Acta.— 2003.— Vol. 1, № 1611.— P. 81—90.
16.Kontcevaya Е. A. // Bull. Exp. Biol. Med.— 2012.— Vol. 153, № 4.— P. S73—S76.
17.Peranzoni E. // Immunobiology.— 2007.— Vol. 212, № 9—10.— P. 795—812.
18.Witte M. В., Barbul A. // Wound Repearand and Regeneration.— 2003.— Vol. 11, № 6.— P. 419—423.
19.Potenza M. A., Nacci C., Mitolo-Chieppa D. // Curr. Drug. Immune Endocr. Metabol. Disord.— 2001.— Vol. 1, № 1.— P. 67—77.
20.Программа и методика II фазы клинических испытаний эффективности лекарственного средства «Лейаргунал» (лейцин/инозин/аргинин) производства РУП «Гоодненский завод медицинских препаратов» в сравнении с плацебо. № 471 от 23 июля 2008 года.— Гродно, 2008.
21.Попруженко Т. В., Терехова Т. Н. Профилактика основных стоматологических заболеваний.— М., 2009.
22.Knychalska-Karwan Z. Zbior wskaznikow stomatologicznychi niektorych testow oraz klasyfikacji.— Wyd. I.— Lublin, 2006.
23.Грудянов А. И. Заболевания периодонта.— М., 2009.
24.Пародонтит / Под ред. А. А. Дмитриевой.— М., 2007.
25.Seymour G. J. // J. Periodontol.— 198S.— Vol.5..— P. 289—293.
26.Kinney J. S., Ramseier C. A., Giannobile W. V. //Ann. NY Acad. Sci.— 2007.— Vol. 1098.— P. 230—251.
27. Симонова А. В. Фенотип лимфоцитов крови при воспалительных заболеваниях человека.— М., 2001.

Поступила 26.02.14.

Адрес для корреспонденции:
Волкова Маргарита Николаевна.
Витебский государственный медицинский университет. 210023, г. Витебск, пр. Фрунзе, 27; сл. тел. (8-0212) 60-13-92.

Ключевые слова: , , , , ,
Автор(ы): Волкова М. Н., Янченко В. В.
Медучреждение: Витебский государственный медицинский университет